Protagonistul, Ezio Auditore da Firenze, este un tanar nobil din Firenze, ce traieste fara griji, savurand din plin placerile vietii: bautura si femeile, fara sa aiba idee despre activitatile secrete ale tatalui sau, Giovanni (pe care il puteti urmari in scurtmetrajul Assassin’s Creed  2: Lineage). Momentul ce determina turnura brusca a vietii lui Ezio este reprezentat de executia lui Giovanni si a celor doi frati ai lui Ezio, fapt care-l face sa jure ca ii va razbuna. Pe masura ce povestea avanseaza, apar tot mai multe personaje istorice (Niccolò Machiavelli, Caterina Sforza, Girolamo Savonarola sau Lorenzo de’ Medici, la care se adaugă scrisori sau descoperiri legate de Dante Alighieri, Marco Polo, Michelangelo, Thomas Edison, Nikola Tesla, Henry Ford, Gandhi, Ioana de Arc, Hitler, Rasputin sau chiar asasinarea lui J.F Kennedy) ce sunt integrate atat de bine, incat ofera credibilitate, iar astfel chiar poti afla lucruri pe care daca nu ai fost prea interesat de istorie pana acum, vei avea ocazia sa le descoperi jucandu-te. Leondardo Da Vinci devine un prieten foarte apropiat pentru Ezio, ajutandu-l pe tot parcursul jocului cu inteligenta sa iesita din comun. Acesta este reprezentat remarcabil, de la voice acting, pana la infatisare, atitudine si faptul ca scria si picta cu mana stanga. Aceste detalii sunt surpinzatoare si reprezinta un punct tare al jocului.